杨宁主任医师
江苏省中西医结合医院 风湿免疫科
1.原理:
免疫组化依赖抗原-抗体反应。通过将标记有酶、荧光素或其他可视物质的抗体与目标抗原结合,能够在显微镜下观察到具体的染色结果。
2.应用:
在病理学中,免疫组化帮助医生确定肿瘤的类型。不同的肿瘤细胞表达不同的抗原标志物,通过检测这些标志物,可以区分出如乳腺癌、肺癌等。
在神经科学研究中,免疫组化可以用于定位和定量分析神经元中的特定蛋白质,从而帮助理解神经系统的功能和疾病机制。
在感染病学中,通过免疫组化可以检测病原体,如病毒、细菌在组织中的位置和数量,帮助明确感染的部位和程度。
3.步骤:
制备组织切片:从新鲜或固定的组织中切取薄片。
抗原修复:使用热或酶处理切片,以暴露抗原。
阻断非特异性结合:使用非特异性蛋白阻断切片表面,防止抗体与非靶标结合。
一抗孵育:将切片与第一抗体(专门针对目标抗原的抗体)孵育。
二抗孵育:使用带有标记的第二抗体结合第一抗体,放大信号。
显色:加入底物使标记物生成可见信号,通过显微镜观察。
4.注意事项:
切片厚度均匀,避免过厚或过薄影响结果。
每一步骤时间要严格控制,保证充分反应同时避免过度反应。
防止样品污染,确保实验结果准确可信。
免疫组化技术在医学和生物学研究中具有重要意义,但操作过程中需要高度精确和严谨的实验设计。