肿瘤基因检测方法

肿瘤基因检测方法主要包括组织活检测序、液体活检测序、聚合酶链反应、荧光原位杂交和免疫组织化学五类，选择依据肿瘤类型、标本可及性与检测目的确定。组织标本仍是多数实体瘤基因检测的优先标本来源。

一、按技术原理划分的主要方法

1、聚合酶链反应：用于检测已知单一位点或少数热点突变，灵敏度较高，所需标本量少，适合表皮生长因子受体基因特定突变、KRAS基因特定密码子突变等靶点筛查；局限在于只能检测预设位点，无法发现未知变异。

2、荧光原位杂交：用于检测基因拷贝数改变和染色体易位，如人类表皮生长因子受体2基因扩增、间变性淋巴瘤激酶基因融合，结果判读依赖荧光显微镜与判读经验。

3、免疫组织化学：检测蛋白表达水平，常作为基因改变的初筛手段，例如错配修复蛋白表达缺失提示微卫星不稳定，需经分子方法确认。

4、一代测序：可读取较长片段序列，适合已知基因外显子区域突变检测，通量低，对低比例突变不敏感。

5、二代测序：可同时检测数十至数百个基因的突变、插入缺失、拷贝数改变及部分融合，分为小 Panel、大 Panel 与全外显子测序，是当前实体瘤多靶点检测的主要手段；报告周期通常为 7 至 14 个工作日。

6、三代测序：读长更长，可用于复杂结构变异与融合基因检测，目前多用于科研场景。

二、按标本来源划分

1、组织活检：穿刺或手术标本经甲醛固定石蜡包埋后检测，肿瘤细胞含量建议不低于 20%，低于该阈值时需富集或改用其他方法。

2、液体活检：采集外周血检测循环肿瘤 DNA，适用于组织标本难以获取、需动态监测耐药突变的情形；早期肿瘤患者外周血循环肿瘤 DNA 浓度可能偏低，阴性结果不能直接排除基因突变。

3、胸腹水、脑脊液等体液标本：在特定肿瘤类型中可作为补充标本。

三、质量与流程要点

1、病理评估：检测前需经病理医师确认肿瘤细胞比例与标本质量。

2、检测平台：应选择通过室间质评的实验室，报告需标注检测方法、覆盖基因、检测限与变异解读等级。

3、临床意义分级：变异按临床意义分为已获批靶向治疗相关、临床试验相关与意义未明三类，意义未明变异不直接指导治疗。

4、动态复检：靶向治疗进展后，可再次取样检测耐药相关变异，条件允许时优先考虑组织再活检。

中国临床肿瘤学会相关指南指出，晚期非小细胞肺癌患者应进行驱动基因检测以指导治疗决策。一项纳入多中心数据的分析显示，二代测序在晚期非小细胞肺癌驱动基因检出方面较单基因序贯检测具有更高的一次性检出效率，具体数值因研究人群与 Panel 设计不同而存在差异。

肿瘤基因检测方法需结合肿瘤类型、标本条件与临床需求综合选择，单一方法难以覆盖全部变异类型。检测前后应由临床医师与病理医师共同解读报告，避免仅凭单项结果决定治疗方向。

常见问题

否。液体活检仅可检测外周血中循环肿瘤 DNA，早期肿瘤或低脱落肿瘤可能漏检，组织活检仍是多数实体瘤基因检测的优先标本来源。

不能。二代测序覆盖范围取决于 Panel 设计，无法稳定检出所有结构变异与低比例突变，阴性结果需结合检测限与标本质量判断。

二代测序通常需 7 至 14 个工作日，聚合酶链反应与荧光原位杂交相对更快，具体时间受标本处理与实验室流程影响。

视情况而定。若标本肿瘤细胞比例低或检测 Panel 未覆盖目标基因，可考虑更换标本或扩大 Panel 复检。

参考资料

[1] 中国临床肿瘤学会. 非小细胞肺癌诊疗指南[M]. 北京: 人民卫生出版社.

[2] 中国抗癌协会. 肿瘤精准检测临床应用专家共识[J]. 中华病理学杂志.

[3] 国家卫生健康委员会. 新型抗肿瘤药物临床应用指导原则.

[4] 中华医学会病理学分会. 肿瘤病理诊断规范[M]. 北京: 人民卫生出版社.