怎样进行尿液培养定量接种

尿液培养定量接种需在无菌条件下采集清洁中段尿，由检验人员用定量接种环取尿样划线接种于血平板和麦康凯平板，经35℃培养18至24小时后计数菌落，再换算为每毫升菌落形成单位。

标本采集与处理

• 清洁中段尿采集：晨起第一次尿最佳，排尿前用温水清洗外阴，弃去前段尿，留取中段尿约10毫升于无菌容器，1小时内送检；不能及时送检者需4℃冷藏，但不超过24小时。
• 导尿标本采集：仅适用于留置导尿管或排尿困难者，用注射器经导尿管侧壁穿刺抽取尿液，避免接触导尿管开口。
• 标本拒收标准：尿液呈明显污染、未使用无菌容器、送检时间超过24小时且未冷藏者，检验科应拒收并重新采集。

定量接种操作步骤

1、接种环选择：采用标准1微升或10微升定量接种环，火焰灭菌后冷却，垂直浸取混匀尿样，避免产生气泡。

2、划线接种：将尿样均匀划线接种于血平板和麦康凯平板，血平板用于观察溶血及菌落形态，麦康凯平板用于鉴别革兰阴性杆菌。

3、培养条件：置35℃±1℃孵育18至24小时，二氧化碳培养箱用于可疑苛养菌，普通孵育箱用于肠杆菌科细菌。

4、菌落计数：选择菌落数在30至300个之间的平板进行计数，乘以接种环稀释倍数，得出每毫升菌落形成单位。

5、结果判读：每毫升菌落形成单位≥10⁵提示感染；10⁴至10⁵为可疑，需结合临床症状；<10⁴多为污染，建议重新留取标本。

质量控制的量化指标

• 接种环校准：每批次定量接种环需用标准菌株验证，误差不超过±5%。
• 培养基质控：每批血平板和麦康凯平板需用大肠埃希菌、金黄色葡萄球菌、铜绿假单胞菌验证生长性能。
• 室内质控频率：每日至少进行一次菌落计数质控，每月参加一次室间质评。

临床意义与常见误差

• 混合菌生长：若平板上出现三种以上细菌且无优势菌，提示污染，应重新采集标本。
• 迟发性生长：培养48小时后才出现菌落，多见于苛养菌或低菌量感染，需延长培养时间。
• 抗菌药物影响：采集标本前已使用抗菌药物者，菌落计数可能偏低，需在申请单上注明用药情况。

操作注意事项

• 无菌操作：接种全过程需在生物安全柜内进行，避免环境杂菌污染。
• 标本混匀：接种前需将尿样充分混匀，但避免剧烈震荡导致细菌聚集。
• 结果复核：每毫升菌落形成单位≥10⁵的结果需由第二人复核并记录。

数据参考

据《全国临床检验操作规程》第4版（中华人民共和国国家卫生健康委员会，2015年）规定，清洁中段尿定量培养是诊断尿路感染的标准方法，菌落计数≥10⁵每毫升对无症状菌尿的诊断特异性超过90%。另据中国细菌耐药监测网2022年年度报告，尿标本占临床分离菌来源的18.7%，其中大肠埃希菌占尿标本分离菌的52.3%。

尿液培养定量接种的核心在于无菌采集、定量接种环划线、35℃培养18至24小时及菌落计数换算。操作全程需遵守无菌规范，标本采集后1小时内送检，菌落计数≥10⁵每毫升提示感染，<10⁴每毫升多为污染。结果判读应结合临床症状与用药史，混合菌生长或迟发菌落需重新评估。

常见问题

是。晨尿在膀胱内停留时间长，细菌浓度高，能提高检出率。但急性尿路感染或无法留取晨尿时，可随时采集清洁中段尿，需在申请单上注明采集时间。

一般需18至24小时。若为苛养菌或低菌量感染，可能延长至48小时。阳性结果会先报告菌落计数和革兰染色初步结果，药敏试验需额外24小时。

否。10⁴每毫升多为污染或低菌量定植，无症状者通常不需治疗。若患者有尿频、尿急、尿痛等症状，需结合尿常规白细胞计数，由医生判断是否抗感染治疗。

是。抗菌药物会抑制细菌生长，导致假阴性。建议停药至少48小时后再采集标本，若病情不允许停药，需在申请单上注明用药名称和停药时间。

不超过24小时。冷藏温度需控制在4℃，且标本采集后1小时内未能送检者才需冷藏。超过24小时冷藏或未冷藏的标本，检验科应拒收并要求重新采集。

参考资料

[1] 中华人民共和国国家卫生健康委员会. 全国临床检验操作规程[M]. 第4版. 北京: 人民卫生出版社, 2015.

[2] 中国细菌耐药监测网. 2022年年度报告[R]. 北京: 中国细菌耐药监测网, 2022.

[3] 中华医学会检验医学分会. 临床微生物学检验标准化操作指南[M]. 北京: 人民卫生出版社, 2018.

[4] 中华人民共和国国家卫生健康委员会. 抗菌药物临床应用指导原则[S]. 北京: 国家卫生健康委员会, 2015.