如何通过间期荧光原位杂交技术检测慢性淋巴细胞白血病中的13q14

间期荧光原位杂交技术检测慢性淋巴细胞白血病13q14缺失，需采用肝素钠抗凝外周血或骨髓样本，经低渗、固定、滴片后与13q14位点特异性探针杂交，再通过荧光显微镜观察信号，每例计数200个间期细胞核，缺失阈值通常设定为大于7.0%。

一、样本采集与处理

1、样本类型：首选外周血，当淋巴细胞绝对值低于5×10⁹/L时建议采用骨髓穿刺样本，两者均以肝素钠抗凝。

2、细胞培养：慢性淋巴细胞白血病细胞分裂指数低，间期荧光原位杂交无需植物血凝素刺激，可直接进行低渗处理。

3、低渗与固定：使用0.075mol/L氯化钾溶液37℃低渗15分钟，随后用甲醇与冰醋酸按3∶1配制的固定液重复固定3次。

4、滴片：将细胞悬液滴于洁净载玻片，自然干燥后于室温老化过夜，或56℃烘烤30分钟。

二、探针与杂交操作

1、探针选择：采用覆盖13q14.3区域的位点特异性探针，常与12号染色体着丝粒探针或13q34探针联合使用作为对照。

2、样本与探针共变性：载玻片与探针混合液在73℃共变性5分钟，随后置于37℃湿盒中杂交16至20小时。

3、杂交后洗涤：依次使用0.4×柠檬酸钠缓冲液与2×柠檬酸钠缓冲液洗涤，去除未结合探针。

4、复染：采用4′，6-二脒基-2-苯基吲哚复染，使细胞核呈现蓝色荧光背景。

三、信号判读与阈值

1、计数规则：每例随机计数200个间期细胞核，仅计数信号清晰、边界完整的细胞核。

2、缺失判定：正常细胞核显示两个绿色荧光信号，若仅见一个绿色信号或绿色信号缺失，判定为13q14缺失。

3、阈值设定：依据《中国慢性淋巴细胞白血病诊疗指南（2022年版）》，13q14缺失的阳性阈值通常为大于7.0%，即200个细胞中超过14个细胞存在缺失。

4、结果报告：报告缺失细胞百分比及克隆性判断，若缺失比例超过阈值则提示存在13q14缺失克隆。

四、临床意义与质量控制

1、预后分层：13q14缺失是慢性淋巴细胞白血病最常见的染色体异常，据《新英格兰医学杂志》2011年发表的国际预后指数研究，单纯13q14缺失患者的中位生存期约为133个月，优于17p缺失和11q缺失。

2、检测时机：依据《中国慢性淋巴细胞白血病诊疗指南（2022年版）》，所有初诊慢性淋巴细胞白血病患者均应进行荧光原位杂交检测，以明确13q14、11q、17p及12号染色体三体等异常。

3、质控要求：每次实验需设立阴性对照与阳性对照，阴性对照缺失率应低于5%，阳性对照应显示预期缺失信号。

4、局限性：间期荧光原位杂交仅能检测探针覆盖区域的缺失，不能发现微小突变或平衡易位，必要时可联合染色体微阵列分析。

慢性淋巴细胞白血病13q14缺失的间期荧光原位杂交检测，核心在于标准化样本处理、严格阈值判读与规范质控，检测结果可为预后分层与治疗决策提供关键依据。样本采集与探针杂交条件需严格按标准操作，阈值判读应结合实验室自身验证数据。

常见问题

否，首选外周血即可。当外周血淋巴细胞绝对值低于5×10⁹/L时，才建议采用骨髓穿刺样本，两者均以肝素钠抗凝。

依据《中国慢性淋巴细胞白血病诊疗指南（2022年版）》，13q14缺失阳性阈值通常为大于7.0%，即计数200个间期细胞核中超过14个存在缺失。

否。该技术仅能检测探针覆盖区域的缺失或扩增，不能发现微小突变或平衡易位，必要时需联合染色体微阵列分析。

是。依据《中国慢性淋巴细胞白血病诊疗指南（2022年版）》，所有初诊慢性淋巴细胞白血病患者均应进行荧光原位杂交检测，以明确13q14、11q、17p及12号染色体三体等异常。

据《新英格兰医学杂志》2011年发表的国际预后指数研究，单纯13q14缺失患者的中位生存期约为133个月，优于17p缺失和11q缺失。

参考资料

[1] 中国抗癌协会血液肿瘤专业委员会. 中国慢性淋巴细胞白血病诊疗指南（2022年版）. 中华血液学杂志, 2022.

[2] International CLL-IPI working group. An international prognostic index for patients with chronic lymphocytic leukaemia. The New England Journal of Medicine, 2011.

[3] 中华医学会血液学分会. 血液病分子诊断技术临床应用专家共识. 中华血液学杂志, 2021.