文旭主任医师
江苏省肿瘤医院 普外科
1.样本采集:从疑似狂犬病感染个体或动物(如唾液、脑组织)中获取样本。确保样本在采集和运输过程中保持无菌状态,以免污染影响结果。
2.核酸提取:使用特定的化学试剂从样本中提取RNA,因为狂犬病毒是RNA病毒。核酸提取的目的是为了获得纯净的病毒RNA,供后续步骤使用。
3.逆转录反应:将提取的RNA通过逆转录酶转录为cDNA(互补DNA),因为PCR扩增需要DNA模板。这个步骤发生在37至50摄氏度之间,通常持续15至30分钟。
4.PCR扩增:利用特异性引物进行聚合酶链式反应,以多轮次循环(通常35至40个循环)来扩增目标cDNA片段。每个循环包括变性(约95摄氏度)、退火(50-65摄氏度)和延伸(72摄氏度)三个步骤。
5.荧光检测:在PCR过程中,添加荧光染料或探针,通过实时荧光信号监测扩增产物的生成,依据荧光强度确定是否存在狂犬病毒RNA。
6.结果分析:根据预设的阈值,对荧光信号的变化进行分析,确定样本中是否含有狂犬病毒的遗传物质。阳性结果提示存在病毒感染。
PCR试验具有高灵敏度和高特异性,是现代医学实验室中常用的病毒检测方法。在样本采集和处理过程中需严格遵循操作规程,以确保结果的准确性和可靠性。