刘燕文主任医师
东南大学附属中大医院 肿瘤科
1.组织取样:通常通过活检获取前列腺组织样本,确保采集的组织具有代表性。
2.组织固定:使用福尔马林等固定液将组织样本进行固定,以防止组织降解并保持组织结构。
3.组织切片:将固定的组织嵌入石蜡,然后利用切片机将其切成厚度约为4微米的薄片。
4.脱蜡处理:将石蜡切片置于一系列酒精溶液中以去除石蜡,并进行水化,使切片准备好接受染色。
5.抗原修复:在适当条件下(例如,高温或酶解)使组织中的抗原表面恢复活性,以便抗体结合。
6.封闭非特异性结合位点:使用封闭剂处理切片,以减少非特异性背景染色。
7.加一抗:选择针对特定抗原的初级抗体,将其加入切片,孵育一定时间以确保抗体与目标抗原特异性结合。
8.加二抗:用标记有报告分子的次级抗体(如荧光素或辣根过氧化物酶)处理切片,与一抗结合。
9.显色反应:使用显色剂与二抗上的报告分子发生反应,产生可见颜色或荧光,以显示抗原的位置和数量。
10.对比染色和封片:可以使用苏木精对细胞核进行对比染色,然后用盖玻片密封保存切片。
11.显微镜分析:在显微镜下观察染色结果,判断抗原的表达情况,对肿瘤性质进行评估。
通过这些步骤,可以获得有关前列腺癌组织中特定蛋白质表达的信息,这对于病理诊断和治疗决策具有重要意义。实验过程中务必严格遵循操作规程,确保实验结果的准确性和可靠性。