HIV抗体初筛实验如何做

HIV抗体初筛实验采用血液样本，通过免疫学方法检测HIV-1/2抗体，常用酶联免疫吸附试验、化学发光免疫试验或快速检测法。实验须在生物安全二级实验室由具备资质人员操作，遵循《全国艾滋病检测技术规范》（2020年修订版）流程。

实验前准备

1、样本采集：采集静脉血3至5毫升，使用不含抗凝剂的真空采血管，室温静置30至60分钟后离心分离血清；也可使用乙二胺四乙酸抗凝管分离血浆。

2、样本保存：血清或血浆样本在2至8摄氏度可保存48小时，长期保存需置于零下20摄氏度或更低温度，避免反复冻融。

3、试剂准备：试剂盒使用前从冰箱取出，平衡至室温，检查有效期与包装完整性，按说明书要求配制洗涤液与工作液。

4、生物安全：操作人员穿戴手套、隔离衣与护目镜，在生物安全柜内处理可能含病毒的样本，废弃物经高压蒸汽灭菌处理。

酶联免疫吸附试验操作步骤

1、加样：在微孔板相应孔中加入稀释液与待检血清，同时设置阴性对照、阳性对照与空白孔，每孔加样量按试剂说明书执行。

2、温育：封板后置于37摄氏度孵育30至60分钟，使抗体与固相抗原结合。

3、洗涤：弃去孔内液体，用洗涤液注满各孔，静置30至60秒后弃去，重复洗涤5至6次，最后拍干。

4、加酶结合物：每孔加入酶标记抗人免疫球蛋白G抗体，37摄氏度孵育30分钟。

5、显色：加入底物溶液，避光室温反应10至15分钟，阳性孔呈现蓝色，阴性孔无色。

6、终止与读数：加入终止液后颜色转为黄色，在酶标仪450纳米波长下读取吸光度值，按试剂盒临界值判定结果。

快速检测法操作步骤

1、加样：在检测卡加样孔中加入血清或血浆2至3滴。

2、缓冲液：随后加入样本稀释液1至2滴，促进层析。

3、判读：15至20分钟内观察结果，检测线与质控线均显色为阳性，仅质控线显色为阴性，质控线不显色则结果无效。

4、记录：结果须在有效时间内读取，超时判读可能导致假阳性。

结果判定与后续处理

初筛试验阳性仅提示需要进一步确认，不能直接诊断HIV感染。根据《全国艾滋病检测技术规范》（2020年修订版），初筛阳性样本须送确证实验室进行免疫印迹试验或核酸检测。中国疾病预防控制中心2022年数据显示，全国艾滋病检测量超过2.8亿人次，初筛阳性经确证后阳性符合率约为95%以上。初筛阴性若处于窗口期，建议在高危行为后4至6周复查。

初筛试验依赖规范操作与合格试剂，阳性结果必须经确证试验方可报告。样本采集、温育时间、洗涤次数与判读时限均影响结果准确性，实验室应建立室内质控与室间质评体系。

常见问题

否。初筛阳性仅作为筛查提示，必须经免疫印迹试验或核酸检测确证，确证阳性方可诊断HIV感染。

不需要。HIV抗体检测不受进食影响，随时可采集静脉血，结果判读依据抗体反应而非代谢物浓度。

两者均用于初筛，酶联免疫吸附试验通量高、适合批量检测；快速检测法操作简便、适合现场使用，阳性均需确证。

建议在4至6周后进行，窗口期内抗体浓度不足可能导致假阴性，必要时在3个月后复查以排除感染。

参考资料

[1] 中国疾病预防控制中心. 全国艾滋病检测技术规范（2020年修订版）. 2020.

[2] 中国疾病预防控制中心. 2022年全国艾滋病检测工作数据报告. 2023.

[3] 李兰娟， 任红. 传染病学. 第9版. 北京： 人民卫生出版社， 2018.

[4] 中华医学会检验医学分会. 感染性疾病免疫学检测临床应用专家共识. 中华检验医学杂志， 2021.