支原体污染细胞的表现

支原体污染细胞后，最典型的表现是细胞形态改变、生长变慢与培养液提前变酸，但污染初期常无明显浑浊，容易与普通老化或营养不足混淆。确诊需依靠聚合酶链反应、荧光染色或支原体培养等专项检测，不能仅凭肉眼观察判断。

支原体污染细胞的主要表现

1、细胞形态改变：细胞体积可变小或变大，边缘不规则，贴壁能力下降，胞质内出现颗粒或空泡，部分细胞从瓶壁脱落。

2、生长速度下降：传代后倍增时间延长，接种相同数量时，贴壁细胞覆盖率明显低于未污染对照，连续传代后差异更明显。

3、培养液变化：培养液在24至48小时内提前变黄，提示代谢产酸增加，但液体通常不出现明显浑浊，与细菌污染不同。

4、细胞功能异常：转染效率下降，蛋白表达水平波动，病毒包装滴度降低，部分实验重复性变差。

5、显微镜下特征：普通倒置显微镜下常无特征性结构，荧光染色可见细胞表面或细胞间隙有细小点状荧光，聚合酶链反应可检出支原体核酸。

数据与依据

美国典型培养物保藏中心2019年发布的技术说明指出，全球细胞培养实验室中支原体污染率约为15%至35%，其中多数污染在常规显微镜检查中未被发现。中国食品药品检定研究院2020年发布的细胞制品质量控制相关技术资料也提出，细胞基质需进行支原体检测，检测方法包括培养法、指示细胞法和聚合酶链反应法。上述数据说明，仅凭外观判断污染并不可靠。

处理与预防

• 一旦确认污染，应直接丢弃污染细胞及同批次培养物，避免继续使用。
• 对培养箱、超净工作台、水浴锅进行彻底消毒，更换新批次培养基和血清。
• 新引入细胞需先隔离培养并完成支原体检测，合格后再与原有细胞共同操作。
• 定期对实验室全部细胞进行支原体筛查，建议每1至3个月检测一次；频繁进行转染或病毒包装的细胞，检测间隔应缩短至每月一次。

支原体污染细胞以形态异常、生长减慢和培养液提前变酸为主要线索，确诊依赖专项检测。日常操作中应坚持隔离检测与定期筛查，防止污染在实验室内部扩散。

常见问题

通常不会。支原体体积小，不引起明显浊度，培养液多表现为提前变黄，而非浑浊，因此不能以浑浊作为判断依据。

多数情况下不能。普通倒置显微镜难以分辨支原体，需用荧光染色、聚合酶链反应或培养法确认。

不建议继续使用。污染细胞会干扰实验结果，并可能扩散至其他培养物，应丢弃并彻底消毒环境。

常规细胞建议每1至3个月检测一次；频繁转染或病毒包装的细胞，建议每月检测一次。

参考资料

[1] 美国典型培养物保藏中心. 细胞培养支原体污染技术说明. 2019.

[2] 中国食品药品检定研究院. 细胞制品质量控制相关技术资料. 2020.

[3] 中国细胞生物学学会. 细胞培养实验室质量控制指南. 2021.