免疫组化需要多久

2024-11-28
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刘宇飞副主任医师

江苏省肿瘤医院 肿瘤内科

病情分析:免疫组化(免疫组织化学)通常需要1至2天的时间,具体取决于实验室的流程和所使用的抗体种类。

1.样本准备:需要对组织样本进行固定和切片。这一步一般需要2至24小时。常用的固定剂是福尔马林,固定时间和温度会影响后续染色效果。

2.抗原修复(可选):有些样本需要进行抗原修复,以揭示更多的抗原位点,使抗体更容易结合。这一步通常需要15至30分钟。

3.阻断非特异性结合:为了减少背景染色,需使用封闭液封闭样本表面的非特异性结合部位,这一步通常需要30分钟至1小时。

4.一抗孵育:将一抗(针对目标抗原的抗体)与样本孵育,以确保抗体能充分结合到样本中的目标抗原。这一步通常需要1小时至过夜(12至24小时),具体时间依抗体不同而异。

5.洗涤:为了去除未结合的一抗,需要多次用缓冲液洗涤样本,每次洗涤时间为5至10分钟,总共3至5次。

6.二抗孵育:二抗用于识别并结合一抗,再次对样本进行孵育。二抗通常是带有标记物(如酶或荧光)的抗体,这一步通常需要30分钟至1小时。

7.洗涤:类似一抗孵育后的洗涤步骤,用缓冲液对样本进行多次洗涤。

8.显色:如果使用酶标记的二抗,通过添加底物产生颜色反应;如果使用荧光标记的二抗,则直接在显微镜下观察。这一步一般需要5至30分钟。

9.封片:将染色后的样本用盖玻片封装,以便于显微镜观察。这一步通常需要几分钟。

以上步骤大约需要1至2天时间,不同实验室可能存在细节上的差异。样本准备和抗体孵育的质量直接影响最终结果,因此每一步都要严格按照标准操作流程执行。

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