流式细胞术排除了慢性粒细胞白血病，但融合基因阴性是怎么回事

流式细胞术本身不能排除或确诊慢性粒细胞白血病，该病的确诊依据是费城染色体或BCR-ABL1融合基因阳性；融合基因阴性时，慢性粒细胞白血病的可能性极低，需转向其他疾病方向排查。

为什么流式细胞术不能排除慢性粒细胞白血病

1、检测原理不同：流式细胞术通过细胞表面抗原标记来识别细胞来源和分化阶段，主要用于白血病免疫分型，而慢性粒细胞白血病的核心诊断依据是遗传学异常，即费城染色体或BCR-ABL1融合基因。

2、慢性粒细胞白血病的免疫表型不具特异性：慢性粒细胞白血病慢性期骨髓中粒细胞增多，流式细胞术可显示粒细胞比例升高，但这一表现也见于类白血病反应、感染、炎症及其他骨髓增殖性肿瘤，无法据此确诊或排除。

3、确诊标准明确：根据世界卫生组织造血与淋巴组织肿瘤分类标准，慢性粒细胞白血病的诊断需满足费城染色体阳性或BCR-ABL1融合基因阳性，部分病例表现为隐匿性BCR-ABL1重排，需采用灵敏度更高的方法检测。

融合基因阴性的常见原因

1、检测方法灵敏度差异：常规染色体核型分析灵敏度约为1%至5%，荧光原位杂交约为1%至5%，而实时定量聚合酶链反应灵敏度可达0.01%至0.1%。若采用低灵敏度方法，可能漏检低水平融合基因。

2、检测标本不合格：外周血或骨髓标本采集量不足、抗凝剂使用不当、运输时间过长导致RNA降解，均可造成假阴性结果。

3、罕见变异型易位：约1%至2%的慢性粒细胞白血病患者存在变异型费城染色体，涉及第三条或更多染色体参与易位，常规探针可能无法覆盖断裂点。

4、疾病类型判断有误：若临床怀疑慢性粒细胞白血病但融合基因持续阴性，需重新评估是否为其他骨髓增殖性肿瘤，如原发性骨髓纤维化、真性红细胞增多症、原发性血小板增多症，或非典型慢性髓系白血病。

5、隐匿性BCR-ABL1重排：少数病例融合基因位于复杂重排区域，需采用长距离反向聚合酶链反应或全转录组测序才能检出。

临床处理路径

1、复核检测方法：确认所用方法及灵敏度，必要时采用实时定量聚合酶链反应或荧光原位杂交复检。

2、重新采集标本：规范采集骨髓或外周血，使用乙二胺四乙酸抗凝，4摄氏度条件下24小时内送检，避免RNA降解。

3、完善其他检查：包括骨髓穿刺涂片、骨髓活检、染色体核型分析、JAK2V617F、CALR、MPL等基因突变检测，以鉴别其他骨髓增殖性肿瘤。

4、结合临床特征：脾脏肿大程度、白细胞计数、血小板计数、嗜碱性粒细胞比例等对鉴别诊断有参考价值。

5、多学科会诊：血液科、病理科、遗传学实验室共同讨论，避免单一检测结果误导诊断。

需要关注的问题

融合基因阴性并不能完全排除慢性粒细胞白血病，但概率显著降低。若临床高度怀疑而融合基因阴性，应重复检测并采用互补方法验证。持续阴性者需考虑其他骨髓增殖性肿瘤或反应性粒细胞增多症。诊断应综合临床表现、血液学指标、骨髓形态学及遗传学结果，单一检查不足以定论。

常见问题

否。流式细胞术用于免疫分型，不能检测费城染色体或BCR-ABL1融合基因，确诊慢性粒细胞白血病需依赖遗传学或分子生物学检测。

否。低灵敏度方法、标本RNA降解、罕见变异型易位均可导致假阴性，临床高度怀疑时应换用高灵敏度方法复检。

应完善骨髓穿刺涂片、骨髓活检、染色体核型分析，并检测JAK2V617F、CALR、MPL等突变，以鉴别其他骨髓增殖性肿瘤。

类白血病反应无费城染色体及BCR-ABL1融合基因，常继发于感染或炎症，中性粒细胞碱性磷酸酶积分升高，而慢性粒细胞白血病该积分降低。

实时定量聚合酶链反应通常需3至7个工作日，荧光原位杂交需2至5个工作日，染色体核型分析需10至14个工作日，具体时间因实验室流程而异。

参考资料

[1] 中华医学会血液学分会. 慢性髓性白血病中国诊断与治疗指南（2020年版）. 中华血液学杂志, 2020, 41(5): 353-364.

[2] 世界卫生组织. 造血与淋巴组织肿瘤分类（2017年修订版）. 国际癌症研究机构, 2017.

[3] 中国临床肿瘤学会. 慢性髓性白血病诊疗指南（2021年版）. 人民卫生出版社, 2021.

[4] 张之南, 郝玉书, 赵永强, 等. 血液病学（第3版）. 人民卫生出版社, 2020.

[5] 中华医学会检验医学分会. 血液病分子诊断技术临床应用专家共识. 中华检验医学杂志, 2019, 42(8): 617-626.