如何检测土松狂犬病毒

狂犬病毒检测不能通过外观或行为直接判断，必须依靠实验室病原学或血清学方法。土松若疑似暴露，应优先检测脑组织、唾液或脑脊液中的病毒核酸或抗原，活体检测以唾液和脑脊液样本为主。

1、检测对象选择：死亡土松优先采集脑组织，尤其海马回、脑干和小脑部位；活体土松可采集唾液、脑脊液及颈部皮肤毛囊样本，其中唾液样本采集无创且可重复。

2、直接荧光抗体试验：将脑组织印片或冷冻切片与荧光标记的抗狂犬病毒核蛋白抗体结合，在荧光显微镜下观察胞浆内亮绿色颗粒，该方法是世界卫生组织推荐的死后确诊金标准之一。

3、逆转录聚合酶链反应：提取样本中病毒核糖核酸，经逆转录和扩增检测狂犬病毒特异性基因片段，唾液样本灵敏度约为70%至100%，脑组织样本接近100%，结果通常在数小时内获得。

4、酶联免疫吸附试验：检测脑组织或唾液中的狂犬病毒抗原，适用于批量筛查，但阳性结果需用直接荧光抗体试验或逆转录聚合酶链反应确认。

5、病毒分离：将样本接种于小鼠脑内或神经母细胞瘤细胞系，观察发病或细胞病变，该方法耗时较长，通常用于科研和确诊复核。

6、血清学检测：检测未接种疫苗土松血清中的狂犬病毒中和抗体，抗体滴度达到0.5国际单位每毫升以上提示近期感染，但接种过疫苗的动物会出现假阳性。

世界卫生组织在2023年发布的狂犬病立场文件中指出，直接荧光抗体试验仍是死后诊断的首选方法，逆转录聚合酶链反应可作为活体生前检测的重要补充。中国疾病预防控制中心2022年发布的狂犬病预防控制技术指南要求，疑似狂犬病动物脑组织应送省级或市级疾病预防控制中心实验室进行确认。一项2021年发表于《中国人兽共患病学报》的多中心研究显示，采用逆转录聚合酶链反应检测疑似狂犬病犬唾液样本，阳性检出率为82.3%，而直接荧光抗体试验检测脑组织阳性检出率为96.7%。若土松出现恐水、吞咽困难、行为异常等表现，应立即隔离并联系当地动物疫病预防控制机构，由专业人员完成采样和送检，不得自行解剖或处置。

狂犬病毒检测依赖实验室方法，活体以唾液和脑脊液逆转录聚合酶链反应为主，死后以脑组织直接荧光抗体试验为准。

常见问题

是。活体土松可采集唾液和脑脊液，采用逆转录聚合酶链反应检测病毒核酸，但灵敏度低于死后脑组织检测。

直接荧光抗体试验是首选方法，将脑组织切片与荧光标记抗体结合，显微镜下观察特异性绿色荧光颗粒即可判断。

应送省级或市级疾病预防控制中心实验室，或当地动物疫病预防控制机构指定的狂犬病检测实验室完成确认。

唾液逆转录聚合酶链反应灵敏度约为70%至100%，阳性可确诊，阴性不能完全排除，需结合脑组织检测综合判断。

参考资料

[1] 世界卫生组织. 狂犬病立场文件. 2023.

[2] 中国疾病预防控制中心. 狂犬病预防控制技术指南. 2022.

[3] 中国人兽共患病学报. 逆转录聚合酶链反应检测犬唾液狂犬病毒的多中心研究. 2021.